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体彩开奖中国竟彩网:ELISA检测试剂盒,人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA检测试剂盒

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HMGB-1
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人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人高迁移率族蛋白 B1(HMGB-1)水平。用纯化的人迁移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加高迁移率族蛋白 B1(HMGB-1),再与 HRP 标记的高迁移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗体结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在
  HMGB-1ELISA检测试剂盒,人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA检测试剂盒的详细资料:


人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA检测试剂盒实验原理 
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人高迁移率族蛋白 B1(HMGB-1)水平。用纯化的人迁移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加高迁移率族蛋白 B1(HMGB-1),再与 HRP 标记的高迁移率族蛋白 B1(HMGB-1)抗体结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的高迁移率族蛋白B(HMGB-1)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算品中人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)浓度。 

试剂盒组成 

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1瓶 

2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(320µg/L) 0.5ml×1 瓶 

3 酶标包被板 12孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1份 
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2张 
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 
标本要求 
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 

人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA检测剂盒操作步骤 
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 

160µg/L 5号标准品 150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液 
80µg/L 4号标准品 150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液 
40µg/L 3号标准品 150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液 
20µg/L 2号标准品 150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液 
10µg/L 1号标准品 150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液 
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 

3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。 
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用 
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复5次,拍干。 

6. 加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。 
7. 温育:操作同3。 
8. 洗涤:操作同5。 
9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分

钟. 
10. 终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 

计算 
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 

人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA检测试剂盒注意事项 
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间zui好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 

4. 请每次测定的同时做标准曲线,zui好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔*孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。 

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 
6.底物请避光保存。 
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 
9.本试剂不同批号组分不得混用。 
人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA检测试剂盒保存条件及有效期 
1.试剂盒保存:;2-8℃。 
2.有效期:6个月

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