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细胞株的保存方法
点击次数:105 发布时间:2019-09-02

    1.紫外消毒30min后封闭紫外灯,开启超净台正常作业状况,用酒精消毒操作者的双手。

    2.将所需的培育基,胰酶确保瓶身洁净后放于作业台面内,点燃酒精灯,将培育基和胰酶瓶口用酒精棉球擦洗后,再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次,旋开瓶盖后再次分别消毒瓶口和瓶盖,分别放于酒精灯的两边。特别是将培育基瓶放于斜架上,瓶口对准酒精灯,且放在间隔酒精灯zui近的位置,瓶盖置于酒精灯的另一侧。
    
    ?3.将培育瓶瓶口在酒精灯上消毒2-3次,旋开后分别再次消毒瓶口和瓶盖2-3次,盖放于酒精灯右侧后将培育瓶内的培育液悬空倒进污缸,在酒精灯消毒2-3次瓶口,竖直放好。取1ml移液器快速移动在酒精灯上消毒1-2次,然后再装上枪头汲取1.5ml胰酶液,悬空移入培育瓶内。

    4.将培育使胰酶浸没整个瓶壁的细胞层,计时约40s,立马竖起对着灯光可观察到细胞与细胞之间有zhen孔样缝隙,并有1-2个细胞掉落,这时为胰酶消化的zui适时机。若看到成片的细胞从瓶壁掉落为胰酶消化过度;若看不到zhen孔样缝隙和细胞掉落,则需持续消化,悄悄的敏捷平放培育瓶使胰酶浸没细胞层1s后敏捷竖起对着灯光观察细胞情况,可反复几回,直至出现zhen孔样缝隙和1-2个细胞掉落的消化状况。用移液器将胰酶吸净。

    5.汲取1ml细胞冻存液于培育瓶内,并用移液器汲取少数的培育基轻柔的反复冲洗培育瓶壁5-8次,使贴壁细胞彻底掉落于培育基内再悄悄吹打2-3次,使细胞尽可能处于单个悬浮状况。

    6.将1ml含有细胞的冻存液移入新的保种管内,拧紧瓶盖,做好试验符号。

    7.将培育基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧,熄灭酒精灯,收拾试验台面,取出试验试剂及污缸等,封闭超净作业台。

    8.将保种管先放于4℃冰箱 30min后拿出放置-20℃冰箱过夜,次日再放于-80℃的冰箱内3-4天,zui后存放于-196℃的液氮灌内长期保存。

    注此进程也可简化因实际操作进程中经历所得:步骤7结束后将保种管用干脱脂棉包裹后胶带封好直接放于-80℃冰箱内4-5天,即可放于液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存细胞株2-3月。

 

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