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培养基生产和使用常见问题
点击次数:97 发布时间:2019-08-30

    培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多,根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基;根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基;根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等;根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH,还须进行灭菌,通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质,易被污染或变质。配好后不宜久置,zui好现配现用。

    1.低血清培养基能用肉眼判断其pH值吗?
    答:低血清培养基中酚红的含量与普通培养基中的酚红含量不同,不能通过肉眼观察或通过经验来判定pH值,建议使用pH计进行测定。

    2.低血清培养基的缓冲系统是什么?
    答:平衡盐一般是由无机盐及葡萄糖组成的。平衡盐有Hanks′系统、Earle′s系统、Dulbecco′s磷酸缓冲盐系统等。199系列培养基、MEM系列培养基均有Hanks′系统的培养基及Earle′s系统的培养基。但是有些培养基均不是以上常规的平衡盐系统,例如RPMI 1640培养基、F12培养基。MEM(SLM)低血清培养基的平衡盐系统也不是常规的平衡盐系统,该平衡盐系统的缓冲能力强于常规平衡盐系统的缓冲能力。

    3.谷氨酰胺溶液和碳酸氢钠的配制方法是什么?
    答:以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制为例:称取L-谷氨酰胺2.92g,加注射用水100ml,充分搅拌混匀。用0.2μm滤膜正压过滤除菌。溶液应在4℃下避光保存,2周内使用。

    以7.5% NaHCO3的配制为例:称取NaHCO37.5g溶于100ml蒸馏水中过滤除菌。

    4.什么培养基中可以省去加酚红?
    答:酚红在培养基中用作pH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。酚红本身对生物制品质量并不会产生影响,可以通过纯化技术去除,但酚红在无血清培养基可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长,当然这种作用能被血清所中和或减轻。 酚红并不是培养基中必需的一种成分,很多国外的疫苗或抗体生产企业在生产过程中都使用无酚红培养基。

    5.放置在冰箱中的培养基颜色会发生变化,为什么?
    答:培养基保存于4℃冰箱中,培养基内CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中酸碱指示剂(通常为phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱后再用于细胞培养将造成细胞生长停滞或死亡。培养基偏碱时,可以通入无菌过滤的CO2,以调整pH值。

    6.无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗?
    答:当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。因为血清中的蛋白会结合和灭活一些抗生素。而在无血清培养条件下,抗生素不被灭活。

 

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