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植物细胞组织培养
点击次数:345 发布时间:2019-01-10

     实验目的

    植物细胞和组织培养的技术性强,要求无菌操作,通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术,加深对无菌操作的了解。

    二.实验原理

    植物的性:植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力,称为植物的性。

    植物组织培养就是利用植物的性进行离体无菌植物培养的一门技术。植物组织培养按其原始意义,就是指愈伤组织培养。但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养。因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术。

    本实验选择豌豆为材料,豌豆(Pisumsativum)属豆科植物,是粮食、饲料和重要的蔬菜作物,也是遗传学家和植物生理学家感兴趣和乐于采用的实验植物,豌豆的根、茎、子叶、下胚轴、上胚轴、花芽等外植体,皆可形成愈伤组织,其中茎尖、幼胚、幼叶等器官可成功的再生成植株。茎尖培养可包括小至十几微米的茎尖分生组织(生长点)和大至几十毫米的茎尖或更大的芽培养。在实践应用上,常采用生长点的培养使患病植物去病毒,以达到挽救优良品种,提高产量和质量之目的。

    三.实验材料

    仪器设备:1.酒精灯、三角烧瓶,培养皿;2.镊子、剪刀、剖针;3.双筒解剖显微镜;4.光照培养箱或温室;

    材料烟草无菌苗、豌豆幼苗。

    试剂

    (1)MS培养基,植物激素:NAA、6-BA等;

    (2)饱和漂液(次氯酸钠);

    (3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;

    (4)无菌水

    四.实验步骤

    豌豆苗的茎尖培养

    ⑴取发芽6天的豌豆幼苗10株,简取1厘米左右的茎尖,浸入70%的酒精中1分钟,再浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒15分钟,(此步以后要求无菌)用无菌水中冲洗5次,在灭菌的滤纸上吸干水分,放入灭菌的培养皿中。

    ⑵在双目解剖镜下,用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥,用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥。

    ⑶将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-苄基腺嘌呤(6-BA)的培养基上诱导愈伤组织形成,用封口膜将培养皿封好。

    (4)在恒温培养箱中,26℃下,培养六周,形成愈伤组织,经继代后,可用于生根培养

 

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